本標準適用于食品中蘇丹紅染料的檢測。
一、方法原理
樣品經溶劑提取、固相萃取凈化后，用反相高效液相色譜—紫外檢測器進行色譜分析，采用外標法定量。
二、主要儀器設備
1. 上海儀電分析LC210高效液相色譜儀，帶紫外檢測器
2. FA2004電子天平
3.超聲波水浴
4.旋轉蒸發儀
5.勻漿機
6.離心機
三、試劑
1.乙腈：色譜純
2. 磷酸：分析純
3. 甲醇：色譜純
4.標準物質：蘇丹紅Ⅰ、蘇丹紅Ⅱ、蘇丹紅Ⅳ；純度≥95%
5.蘇丹紅標準儲備液：準確稱取適量蘇丹紅標準物質，用乙腈配制成10 μg/mL的標準貯備液。
四、操作步驟
1、樣品制備
具體前處理方法參考國家標準GB/T19681-2005。
2、高效液相色譜儀參考條件
色譜柱：C18 4.6 mm(i.d)×250mm，5μm；
梯度程序：
流動相A: 乙腈
流動相B: 0.2 % 磷酸水溶液
功能 | T(min) | A(%) | B(%) |
0 | 18 | 88 | 12 |
1 | 2 | 100 | 0 |
0 | 10 | 100 | 0 |
1 | 0.1 | 88 | 12 |
0 | 9.9 | 88 | 12 |
流速：1 mL/min；
柱溫：40℃
波長：518 nm；
測定：取相同體積試樣制備液和標準使用液分別注入高效液相色譜儀，根據保留時間按定性，外標峰面積法定量。
3、結果計算
試樣中蘇丹紅的殘留量按下式進行計算。
X=C*V/M
式中：
X——樣品中蘇丹紅的殘留量，單位為毫克每千克mg/kg；
C——由標準曲線得出的樣液中蘇丹紅的濃度，單位為微克每毫升μg/mL；
V——樣液最終定容體積，單位為毫升mL
M——樣品質量，單位為克g；
4、備注：
參考色譜圖：
2.5 μg/mL蘇丹紅標準混合溶液
序號 | 保留時間 | 峰面積 | 峰高 | 半高峰寬 | 峰分離度 | 理論塔板數 | 峰拖尾因子 |
1 | 7.535 | 102077 | 9082 | 10.555 | 12.72 | 10487 | 1.00 |
2 | 12.854 | 116226 | 5751 | 18.979 | 28.00 | 9440 | 0.97 |
3 | 28.304 | 108925 | 5117 | 19.991 | 0.00 | 41255 | 0.95 |
