一、熊果酸介紹
熊果酸為山楂中的主要活性成分，具有抗高血脂、降血糖、鎮靜、抗炎、抗菌等多種藥理作用，熊果酸還具有明顯的抗氧化功能。2015年版藥典山楂項下未對其熊果酸建立含量測定。
二、方案簡介
目的：建立山楂中熊果酸含量測定HPLC方法。
方法：采用高效液相色譜法檢測熊果酸含量，以甲醇-水（20：80）為流動相，檢測波長為210nm，流速為10ul。
結果：標準曲線的繪制及線性范圍得熊果酸線性回歸方程為y=22.3880x+1.2043，相關系數r為0.9998，表明熊果酸在1～60μg/ml范圍內呈現良好線性關系。精密度RSD為1.09%，重復性RSD為1.83%，表明該方法重現性良好。72小時內穩定性試驗熊果酸峰面積RSD為1.10%，表明該樣品溶液的穩定性良好。
結論：熊果酸可作為山楂質量控制指標之一，本方法簡便、準確、靈敏度高、重現性好，可作為山楂中熊果酸的含量測定方法，可有效控制山楂的內在質量。
三、方案詳解
1、儀器及試藥
1.1儀器
高效液相色譜儀（四元梯度系統），紫外檢測器，色譜柱為ZorbaxSB-C18（4.6×250mm，5μm），紫外可見分光光度計，數控超聲波清洗器，電子調溫電熱套，恒溫搖床。
1.2試藥
熊果酸對照品：(中國食品藥品檢定研究院，批號:110742-201212，供含量測定用)；山楂藥材（經檢驗為藥典品種的市售樣品）
2、方法與結果
2.1山楂中熊果酸測定
本文采用高效液相色譜法測定山楂中熊果酸的含量，為山楂藥材質量控制提供科學依據。
2.1.1檢測波長測定
取熊果酸對照品，加甲醇溶解并制備成一定濃度的溶液，以甲醇為空白溶劑，經紫外可見分光光度計測定其最大吸收波長，結合現有文獻資料報道，最后確定檢測波長為210nm。
2.1.2流動相優化
在文獻資料中，有用乙腈-水-磷酸、甲醇-磷酸鹽緩沖液、乙腈-甲醇-0.5%醋酸銨等系統作為流動相，但經實驗考察后發現，這些系統存在或可能分析時間過長，或樣品分離效果欠佳等因素。經實驗摸索后發現，以甲醇-水系統可以很好的避免影響因素。
2.1.3色譜條件
以甲醇-水（80：20）為流動相，檢測波長為210nm，柱溫40℃，進樣量為10μl。經測定，分離度均大于2.0%，理論塔板數均在6000以上。
2.1.4熊果酸對照品儲備溶液的制備
精密稱取熊果酸對照品0.01272g，置10ml容量瓶中，加甲醇溶解至刻度，搖勻，即得對照品儲備液（濃度約1.0mg/ml）。
2.1.5供試品溶液的制備
取本品粉末（過2號篩）0.5g，精密稱定，置錐形瓶中，精密加入甲醇50ml，稱定重量，浸泡1h，超聲30min，放冷，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，即得。
2.1.6標準曲線的繪制及線性范圍
精密量取上述對照品儲備液，置量瓶中，分別制備1、2、5、10、20、60μg/ml的標準溶液，用2.1.3項下的色譜條件繪制標準曲線，得熊果酸線性回歸方程為y=22.3880x+1.2043，相關系數r為0.9998，表明熊果酸在1～60μg/ml的濃度范圍內呈現良好的線性關系。
2.1.7供試品溶液制備方法的優化
2.1.7.1取本品粉末（過2號篩，下同）0.5g，精密稱定，置錐形瓶中，精密稱定，精密加入甲醇50ml，稱定重量，浸泡1h，水浴鍋加熱回流30min，放冷，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，即得。
2.1.7.2
取本品粉末0.5g，精密稱定，置錐形瓶中，精密加入甲醇50ml，稱定重量，浸泡24h，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，即得。
2.1.7.3
取本品粉末0.5g，精密稱定，置錐形瓶中，精密加入甲醇50ml，稱定重量，浸泡1h，超聲30min，放冷，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，即得。
經測定，方法3的提取效率明顯優于方法1、2，在結合實際工作中的可操作性和提取率，最后確定方法3作為最終的提取方法。
2.2精密度試驗
取10μg/ml熊果酸對照品溶液，按上述色譜條件進樣，重復進樣6次，測得RSD為1.09%，表明儀器性能良好。
2.3重復性試驗
取同一批山楂樣品5份，按上述樣品制備項下方法，依法操作制備樣品溶液。平行測定5次，結果熊果酸的平均含量為0.57%，RSD為1.83%。表明該方法重現性良好。
2.4穩定性試驗
取同一批山楂制備的樣品溶液，在常溫下放置，分別于0、6、24、48、72h分別測定1次，結果RSD為1.10%，表明該樣品溶液的穩定性良好。
2.5回收率試驗
精密稱取已知熊果酸的山楂樣品約0.5g，共5份，分別精密加入對照品溶液(熊果酸濃度為0.05088mg·ml-1)10ml，按上述樣品制備方法制備加樣回收供試品溶液并注入高效液相色譜儀，計算平均回收率。
3、討論
山楂作為常用的中藥材（飲片）之一，在2015年版藥典收錄的方法中，未采用HPLC或者更先進的方法測定其活性成分的含量。本實驗方法剛好彌補了這個空缺，更好的體現中藥現代化要與時俱進的要求，更符合中國中藥標準現代化的要求。
本方法操作簡便，較更好的鑒別山楂內在質量的優劣，可以替代熊果酸薄層鑒別，更具有科學性。
（內容來源儀器信息網）
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