高壓蒸汽滅菌器操作較為簡單，基本的操作都大同小異，根據每個機器功能的不同會稍有差別。下面介紹下高壓蒸汽滅菌器如何操作使用。
一、準備
在將滅菌器械放前，在將滅菌器械放入滅菌器之前，請您先將其清洗干凈，以避免滅菌器械上的殘留物質對滅菌器本身以及滅菌器械產生危害。例如血跡以及其它雜質。
下面的清洗方案供參考：
1）使用后需要滅菌的器械，應立即清洗滅菌器械上附著的殘留物。推薦使用清洗機、凈化劑和蒸餾水清洗滅菌器械。
2）清洗后，建議再用清水沖洗一遍，以確保其清潔。
3）在把器械放入滅菌提籃時，請將不同類別的器械分別放置在不同的提籃中，例如不銹鋼、碳鋼等，并且器械之間應留有適當的間隙。如果在提籃中盛放碳鋼器械，在放置前，提籃上應當墊上若干層消毒紙或木棉紙，避免碳鋼和不銹鋼直接接觸。
4）試管、玻璃瓶等的滅菌應使開口向下豎直放置，以便于置換冷空氣和飽和蒸汽的進入。
5）在每一個提籃中放置一個滅菌指示卡。
6）每月一次，在負載中放置生物孢子檢測指示劑，檢測滅菌效果。
7）提籃不允許超載（12kg），否則將會引起不充分的滅菌和干燥。
8）滅菌時需包裹的器械應選用透氣性好的包裝材料，例如滅菌袋、滅菌紙、薄紗織物等。
9）試管玻璃瓶等的滅菌，應使開口向下豎直放置，以便于空氣的排出和蒸汽的進入。
橡膠管滅菌前的準備工作如下：
請先用溫水清洗橡膠管，然后將其放置在清潔的滅菌托盤上，同時確保管子是兩頭開口的空心管道，無任何急拐彎、扭曲、扭結等。
敷料包滅菌前的準備工作如下：
把敷料包垂直放在托盤上，避免與滅菌器內壁接觸。
培養基滅菌前的準備工作：
僅限用耐熱玻璃瓶，裝載量不超過1/2容積，容器封口應使用透氣性瓶塞。
二、升溫
按啟動鍵，滅菌器進入升溫行程。
2.1升溫指示燈亮（注意：必須高水位燈亮時才能加熱）。
2.2上排數碼管顯示內室溫度，下排數碼管顯示排冷氣溫度。
2.3電熱管通電，內室開始升溫。同時冷空氣通過排汽閥排放。
2.4當內室溫度到達設定的置換溫度（即設置好的排冷氣溫度）時，排汽閥關閉，電熱管繼續加熱。上排數碼管顯示內室溫度，下排數碼管顯示滅菌時間的數值。
三、滅菌
當內室溫度到達設定的滅菌溫度時，開始滅菌計時，計時以秒為單位遞減。
四、結束
當滅菌時間遞減為0，轉入結束。內室開始排汽，溫度下降，當內室溫度降至102℃，蜂鳴器鳴叫表示滅菌結束。壓力表指針回復“0”位時，稍等一分鐘，即可取出滅菌物品。
注意事項：
長時間滅菌一定保證不能發生漏氣現象，一旦發生漏氣現象鍋體內的水份會逐漸減少，最終可能導致燒干鍋的情況，會發生危險。不漏氣的情況下溫度達到100度排氣閥就會關閉，所以鍋體內水份不會減少也就不會發生危險。所以，在使用過程中如果發生漏氣現象需緊急切斷電源，保證安全。
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