1、范圍
GB/T18932的本部分規(guī)定了蜂蜜中碳-4植物糖含量的穩(wěn)定碳同位素比率測(cè)定方法。本部分適用于各種蜂蜜中碳-4植物(玉米或甘蔗)糖含量的測(cè)定。
2、規(guī)范性引用文件
下列文件中的條款通過(guò)GB/T18932的本部分的引用而成為本部分的條款。凡是注日期的引用文件，其隨后所有的修改單(不包括勘誤的內(nèi)容)或修訂版均不適用于本部分，然而，鼓勵(lì)根據(jù)本部分達(dá)成協(xié)議的各方研究是否可使用這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本適用于本部分。
GB/T6682-1992分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法(neqISO3696:1987)
3、原理
試樣在具有純氧脈沖及催化劑存在的在線式全自動(dòng)Dumas燃燒管中燃燒，經(jīng)化學(xué)純化及氣相色譜儀GC分離后用穩(wěn)定碳同位素質(zhì)譜儀測(cè)定其δ13C值。以蜂蜜蛋白質(zhì)δ13C值為標(biāo)準(zhǔn)，蜂蜜δ13C值與其進(jìn)行比較，根據(jù)其差值來(lái)計(jì)算蜂蜜中碳-4植物糖的含量。
4、試劑及材料
除非另有說(shuō)明，所用試劑均為分析純，水為GB/T6682-1992規(guī)定的一級(jí)水。
橄欖油標(biāo)準(zhǔn):%C=57.00,δ13C PDB=一29.07%。
鎢酸鈉(Na2WO4·2H20 )
硫酸:優(yōu)級(jí)純
0.10mm-0.14mm孔徑尼龍濾布。
10uL移液器。
8mmX5mm錫杯。
10%鎢酸鈉溶液:稱取10g鎢酸鈉，用水定容至100ML。
0.335mol/L硫酸溶液:移取9.4ml,硫酸，用水定容至500mL
5、儀器
5.1 INTEGRA-CN在線式全自動(dòng)穩(wěn)定同位素質(zhì)譜儀或相同性能的同位素質(zhì)譜儀，δ13C測(cè)定精度0.1%。
載氣:氦氣，純度99.999%;助燃?xì)?氧氣，純度99.999% .
5.2 離心機(jī):相對(duì)離心力(RCF) :1500Xg
6 試樣制備與保存
6.1 試樣制備
對(duì)無(wú)結(jié)晶的實(shí)驗(yàn)室樣品，將其攪拌均勻。對(duì)有結(jié)晶的樣品，在密閉情況下，置于不超過(guò)60℃的水浴中溫?zé)幔袷帲龢悠啡咳诨髷噭颍杆倮鋮s至室溫。分出0.5kg作為試樣。制備好的試樣置于樣品瓶中，密封，并標(biāo)明標(biāo)記。
6.2 試樣保存
將試樣于常溫下保存。
7 分析步驟
7.1 試料的制備
7.1.1 蜂蜜樣品
蜂蜜樣品經(jīng)0.10mm-0.14mm孔徑尼龍濾布過(guò)濾，除去蜂蜜中固體雜質(zhì)后，用移液器移取3mL至8mmX5mm錫杯中，密封備用。每個(gè)樣品制備2個(gè)
7.1.2 蜂蜜蛋自質(zhì)樣品
稱取10g~ 12g潔凈的蜂蜜樣品于50mL離心管中，加人4mL水混勻。在一支20ml,量筒中加入2.0mL10%鎢酸鈉溶液和2.0mL0.335mol/L硫酸溶液，迅速混勻后，加到上述盛蜂蜜樣品的離心管中，混勻。置于80℃水浴中加熱不少于30min，在加熱過(guò)程中每間隔5min-10min旋轉(zhuǎn)混合離心管中內(nèi)容物20s，直到有絮狀物析出。以水注滿離心管并混合后， 在RCF為1500Xg下離心5min，傾掉上層清液， 再以約50ml水充分洗滌沉淀物并離心，如此反復(fù)洗滌沉淀物5次，最后倒干上清液，將含有沉淀蛋白質(zhì)的離心管置于750℃烘箱中干燥3h以上。然后，稱取上述烘干的蛋白質(zhì)3.0mg，于8mmX5mm錫杯中，密封備用，每個(gè)樣品制備2個(gè)。
7.1.3 標(biāo)準(zhǔn)物及控制樣品
移取2mL橄欖油標(biāo)準(zhǔn)于8mm X 5mm錫杯中，密封備用，此標(biāo)物作為蜂蜜樣品檢驗(yàn)批的標(biāo)準(zhǔn)和控制樣品移取1m1橄欖油標(biāo)準(zhǔn)于8mm X 5mm錫杯中，密封備用，此標(biāo)物作為蜂蜜蛋白質(zhì)樣品檢驗(yàn)批的標(biāo)準(zhǔn)和控制樣品。
7.2 測(cè)定
7.2.1 位素質(zhì)譜儀的預(yù)調(diào)
確認(rèn)I N TEG RA- CN 同位素質(zhì)譜儀的工作環(huán)境、 氣密性、離子室的真空度均符合要求， 然后檢驗(yàn)INTEGRA - CN的穩(wěn)定性和峰 形， 必 要時(shí)調(diào)整離子源參數(shù)值。確認(rèn)數(shù)據(jù)采集系統(tǒng)設(shè)置正確，必要時(shí)進(jìn)行調(diào)整
7.2.2 檢驗(yàn)批的設(shè)置
在碳同位素測(cè)定條件下，選定兩點(diǎn)標(biāo)準(zhǔn)漂移校正模式， 設(shè)定標(biāo)準(zhǔn)名稱， 輸人標(biāo)準(zhǔn)參數(shù)， 根據(jù)待測(cè)樣品的多少設(shè)定檢驗(yàn)批。
7.2.3 試料測(cè)定
按照已設(shè)定檢驗(yàn)批的順序，在自動(dòng)進(jìn)樣器上擺放好待測(cè)試料， 在計(jì)算機(jī)控制下， 運(yùn)行檢驗(yàn)批進(jìn)行測(cè)定。測(cè)定完畢后， 試 料的δ13C 值由計(jì)算機(jī)自 動(dòng)計(jì)算給出。同一樣品的蜂蜜δ13C 值和其蛋白質(zhì)δ13C值應(yīng)在相同的儀器條件下測(cè)定。
8、結(jié)果計(jì)算
蜂蜜中碳一4植物糖的含量按式(1)計(jì)算:
式中:
X — 蜂蜜中碳-4 植物糖的百分含量;
δ13CP—蜂蜜中蛋白質(zhì)δ13C值;
δ13C H—蜂蜜δ13C值;
- 9.7— 玉米糖漿的平均δ13C值。
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