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行業(yè)應用

旋光法測定淀粉含量的應用方案說明

時間:2017-8-30 10:21:43      閱讀:3403

一、實驗原理

淀粉是植物的主要能量貯藏物質,主要存在于種子、塊根和塊莖中。除此外,淀粉在工業(yè)上的應用也很廣泛。

將磨細的含淀粉樣品與酸性氯化鈣溶液共煮,可使樣品中淀粉輕度水解,同時由于鈣離子與淀粉分子上的羥基絡合,使淀粉分子充分地分散到溶液中,成為淀粉溶液。淀粉分子具有不對稱碳原子,因而具有旋光性,利用旋光儀測定淀粉溶膠的旋光度(α),旋光度的大小與淀粉的濃度成正比,據(jù)此可以求出淀粉含量。
   應注意的是,酸性氯化鈣溶液必須保持pH 值2.30,密度1.30,加時間的長短也要控制在一定范圍,以保證各種不同來源的淀粉溶液的比旋度[α]恒定不變(20℃)。樣品中其他旋光性物質(如糖分)必須預先除去。
二、所需儀器、原料和試劑
樣品:植物樣品、面粉或其他風干樣品

儀器:旋光儀及附件、粉碎機、離心機、電子分析天平、三角瓶、分樣篩(100目)、布氏漏斗、抽濾瓶及真空泵、離心管、小電爐。

               
試劑:
1.醋酸—氯化鈣溶液:
500g氯化鈣溶于600mL 蒸餾水中,過濾至澄清,用比重計在20℃條件下調節(jié)比重1.3左右,再滴加冰乙酸調pH 為2.3。
2.30%ZnSO4溶液
3.15%K4Fe(CN)溶液
三、操作步驟
1、樣品準備
(1)稱樣脫脂:將樣品風干、研磨,通過100目篩,精確稱取約2.5g樣品細粉(要求含淀粉約2g),置于離心管內,加乙醚數(shù)mL 到離心管內,用細玻棒充分攪拌,離心,傾出上清液,再加入乙醚如此操作數(shù)次,以去除樣品的大部分油脂、色素等成分(因油脂的的存在會使以后淀粉溶液的過濾困難)。
收集上清液以備回收乙醚。大多數(shù)谷物樣品含脂肪較少,可免去這個脫脂手續(xù)。
(2)抑制酶活性:加含有氯化高汞的乙醇溶液10mL 到離心管內,充分攪拌,然后離心,傾去上清液,得到沉淀物。
(3)脫糖:加80%乙醇10mL 到離心管中,充分攪拌以洗滌沉淀物(每次都用同一玻棒),離心,傾去下清液。重復洗滌數(shù)次以去除可溶性糖分。
2、溶提淀粉
(1)加醋酸-氯化鈣:先用醋酸氯化鈣溶液約10mL 加到裝有脫脂樣品的離心管中,攪拌后全部傾入250mL三角瓶內,再用醋酸氯化鈣溶液50mL分數(shù)次洗滌離心管,洗滌液并入三角瓶內,攪拌玻棒也轉移到三角瓶內。
(2)煮沸溶解:先用蠟筆標記液面高度,直接置于加有石棉網(wǎng)的小電爐上,在5min內快速煮沸,保持沸騰15~17min,立即取下三角瓶,置流水中冷卻。煮沸過程中要時加攪拌并調節(jié)溫度,防止燒焦或泡沫涌出瓶外,必要時加水保持液面高度。
3、沉淀雜質和定容
(1)加沉淀劑:將三角瓶內的水解液轉入100mL 容量瓶,用醋酸氯化鈣溶液充分洗滌三角瓶瓶,并入容量內,加30%ZnSO41mL 混合后,再加15%K4Fe(CN)1mL,用水稀釋至接近刻度時,加95%乙醇數(shù)滴以破壞泡沫,然后稀釋到刻度,混合、靜置,以使蛋白充分沉淀。
(2)過濾:布氏漏斗(加一層濾紙)抽氣過濾。先倒上清溶液約10mL 于漏斗濾紙上使完全濕潤,待溶液流干后,棄去濾液,再倒溶液進行過濾,用干燥的容器接受此濾液,收集約50mL,供測定之用。
4、測定旋光度
以空白液(乙酸—氯化鈣溶液:蒸餾水=6:4)調旋光儀零點,再將旋光測定管裝滿濾液,小心地按照旋光儀使用說明,進行旋光度的測定。
四、計算

用工作曲線來求得淀粉含量。

(內容來源物光網(wǎng))

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