分光光度計原理內行人都知道，物質在光的照射激發下，產生了對光吸收的效應，物質對光的吸收是具有選擇性的，各種不同的物質都是具有其各自的吸收光譜，因此當某單色光通過溶液時，其能量就會被吸收而減弱，光能量減弱的程度和物質的濃度有一定的比例關系，也即符合于比色原理比耳定律。
然而對于分光光度計吸光度測量條件的選擇，相信很多人都不太了解，一般來說可依據以下幾點去綜合選擇：
1.入射光波長的選擇
應根據吸收光譜曲線，選擇溶液具有最大吸收時的波長作為入射光的波長。
如顯色劑與鈷絡合物在420nm波長處均有最大吸收峰。如用此波長測定鈷，則未反應的顯色劑會造成干擾而降低測定的準確度。因此必須選擇在500nm波長處測定，在此波長下顯色劑不發生吸收。而鈷絡合物則有一吸收平臺。
2.參比溶液的選擇
1）如果顯色劑或其他試劑略有吸收，應用空白溶液（不加試樣的溶液）作參比溶液。
2）如果僅待測物與顯色劑的反應產物有吸收，可用純溶劑作參比溶液。
3）如試樣中其他組分有吸收，但不與顯色劑反應，則當顯色劑無吸收時，可用試樣溶液作參比溶液，當顯色劑略有吸收時，可在試液中加入適當掩蔽劑將待測組分掩蔽后再加顯色劑，以此溶液作參比溶液。
3.吸光度讀數范圍的選擇
實踐證明，吸光度在0.2-0.5內時，測量的相對誤差最小。
可用兩種方法來調整被測溶液的吸光度：
1）控制被測溶液的濃度。如改變取樣量，改變溶液的濃縮倍數或稀釋倍數。
2）選擇不同的比色皿。吸光度小的溶液要用光程長的比色皿，吸光度大的溶液要用光程短的比色皿。
