1、液相色譜柱的活化
對(duì)于液相色譜柱而言，每根色譜柱在裝運(yùn)之前都經(jīng)過了測試，并存放在測試洗脫液中進(jìn)行運(yùn)輸。因此在首次使用時(shí)，反相柱建議80%的甲醇使用檢測樣品1/2的流速?zèng)_洗4小時(shí)，再用流動(dòng)相徹底地平衡色譜柱即可進(jìn)樣分析。如果使用流動(dòng)相添加劑（如緩沖液或離子對(duì)試劑），建議使用含原有比例但不含這些添加劑的流動(dòng)相進(jìn)行中間過渡10至20個(gè)色譜柱體積再更換成分析樣品流動(dòng)相。對(duì)于具有較短化學(xué)鏈（例如C8、苯基、CN）鍵合相的色譜柱，應(yīng)小心確保在使用色譜柱之前對(duì)其進(jìn)行徹底的平衡。這樣可確保重復(fù)性，并有助于防止保留時(shí)間的漂移。
正相溶劑和反相溶劑是不互溶的，這一點(diǎn)不能忽略。對(duì)于新購柱子，首先請(qǐng)注意打開分析測試說明書，了解柱子的保存溶劑。如果保存溶劑與你將要使用的流動(dòng)相不互溶，請(qǐng)先用異丙醇過渡。過渡過程中注意因異丙醇粘度較大，會(huì)導(dǎo)致柱壓升高，適當(dāng)調(diào)低流速。如果流動(dòng)相中含有緩沖鹽類，先用不含緩沖鹽的同比例流動(dòng)相過渡，避免緩沖鹽的析出。
2、C18色譜柱的活化
C18色譜柱采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，是中國藥典特征譜圖唯一指定的色譜柱，也是最常用的液相色譜柱之一。對(duì)于拿到一根新C18柱的時(shí)候應(yīng)該怎樣進(jìn)行活化及維護(hù)呢？
新柱活化，實(shí)際上是一個(gè)平衡的過程，色譜柱在運(yùn)輸和儲(chǔ)存過程中，有可能出現(xiàn)柱內(nèi)溶劑揮發(fā)的情況，導(dǎo)致填料干掉，鍵合相得不到充分潤濕，因此需要活化。按照廠家色譜柱說明書的操作進(jìn)行活化即可。除了用流動(dòng)相平衡外，有時(shí)候還必須用所測樣品對(duì)新柱進(jìn)行平衡，具體平衡方式也很簡單，把前面用來平衡的進(jìn)樣樣品濃度加大，或者不等洗脫完成，連續(xù)進(jìn)樣多針。用待測物對(duì)新柱平衡，目的是將硅膠基質(zhì)填料表面具有非特異性吸附的位點(diǎn)的吸附能力飽和掉。
C18柱會(huì)用甲醇從小流量到大流量慢慢活化，因?yàn)榈土魉俚募状伎梢院芎玫慕䴘櫣潭ㄏ啵规I合相很好的伸展，用溶劑平衡好系統(tǒng)后，可以采取多次進(jìn)樣或者加大進(jìn)樣量的方式以更快的獲得重現(xiàn)的色譜圖，這樣用樣品將色譜柱中的活性位點(diǎn)飽和，就不會(huì)出現(xiàn)異常色譜現(xiàn)象的情況。
