液相色譜使用時(shí)，經(jīng)流動(dòng)相沖洗，柱與流動(dòng)相達(dá)到平衡后，檢測(cè)器測(cè)出一段時(shí)間的流出曲線即基線，一般應(yīng)平行于時(shí)間軸。基線信號(hào)的波動(dòng)即噪音，通常因電源接觸不良或瞬時(shí)過(guò)載、檢測(cè)器不穩(wěn)定、流動(dòng)相含有氣泡或色譜柱被污染所致。基線隨時(shí)間的緩緩變化即漂移，主要由于操作條件如電壓、溫度、流動(dòng)相及流量的不穩(wěn)定所引起，柱內(nèi)的污染物或固定相不斷被洗脫下來(lái)也會(huì)產(chǎn)生漂移。
液相色譜基線波動(dòng)影響樣品測(cè)試，如何排查呢？
1、液相系統(tǒng)沒(méi)有平衡好，柱子里的流動(dòng)相一直在變化，導(dǎo)致基線波動(dòng)；
2、沒(méi)有脫氣機(jī)的儀器，當(dāng)流動(dòng)相未脫氣或脫氣未徹底時(shí)，基線會(huì)出現(xiàn)尖刺峰；
3、當(dāng)色譜柱被污染時(shí)，也會(huì)造成基線波動(dòng)；
4、檢測(cè)器的流通池被污染，造成吸收的不恒定，此時(shí)需要清洗流通池；
5、檢測(cè)器燈能量不足時(shí)，吸收會(huì)變得不穩(wěn)定，這時(shí)基線一般也不穩(wěn)定，特別是在低波長(zhǎng)處尤為明顯；
6、當(dāng)使用低波長(zhǎng)檢測(cè)時(shí)，有時(shí)流動(dòng)相會(huì)使用兩相或以上的等度，這時(shí)混合器的很小的混合比例的誤差都會(huì)被放大，很有可能會(huì)使基線發(fā)生波動(dòng)；
7、流動(dòng)相里的有機(jī)相的截止波長(zhǎng)最好要小于檢測(cè)波長(zhǎng)20nm以上；
8、實(shí)驗(yàn)室環(huán)境不穩(wěn)定，比如溫度忽高忽低，氣流不斷變化等；
9、儀器出現(xiàn)問(wèn)題也會(huì)造成基線波動(dòng)，這種情況下通常也會(huì)出現(xiàn)壓力不穩(wěn)。比如流動(dòng)相過(guò)濾頭堵塞、入口主動(dòng)閥濾芯污染、單向閥被污染物堵塞、泵頭有氣泡、系統(tǒng)流路漏液，比如管路裂開(kāi)、peek接頭沒(méi)完全連上色譜柱而導(dǎo)致的泄露等。
舉例：做多肽藥物時(shí)，流動(dòng)相A：0.1%或者1%TFA水溶液，流動(dòng)相B：0.1%或者1%TFA乙腈溶液，基線波動(dòng)大，流動(dòng)相中不加TFA時(shí)見(jiàn)不到主峰，基線良好。很明顯這是TFA加入流動(dòng)相里，走梯度情況下造成的基線波動(dòng)。TFA優(yōu)于其他離子修飾劑的原因是它容易揮發(fā)，可以方便地從制備樣品中除去。另一方面，TFA的紫外最大吸收峰低于200nm，因此在低波長(zhǎng)下容易出現(xiàn)基線干擾。解決辦法可以建議在其中一瓶流動(dòng)相中等比例加入另一瓶流動(dòng)相的溶液。
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