概述
維生素C是維持人體正常生理代謝不可缺少的一類有機(jī)化合物，在人體內(nèi)參與氨基酸和神經(jīng)傳遞、膠原蛋白合成，具有降低毛細(xì)血管的通透性，刺激凝血功能、增加對(duì)感染的抵抗作用等。人體缺少維生素C會(huì)引起多種疾病，如壞血病。
然而人體所需的維生素C大多數(shù)由新鮮的蔬菜供給，新鮮的青椒中維生素C的含量很高。因此，測(cè)定包括青椒在內(nèi)的新鮮蔬菜中維生素C的含量是營(yíng)養(yǎng)分析的重要內(nèi)容。
還原型維生素C的測(cè)定方法很多，有熒光分光光度計(jì)法、過(guò)氧化物酶法、2，6-二氯靛酚法等。由于它較易被空氣中的氧所氧化，上述方法存在著各種各樣的缺陷。
本應(yīng)用方案選擇鉬藍(lán)比色分光光度法，因?yàn)榱足f酸銨經(jīng)還原劑維生素C還原后，可以生成亮藍(lán)色的絡(luò)合物，通過(guò)分光比色可以測(cè)定青椒中還原維生素C。本法快速、準(zhǔn)確、靈敏度高。
一、實(shí)驗(yàn)部分
1.1儀器與試劑
6%的鉬酸銨溶液:準(zhǔn)確稱取鉬酸銨 30. 0000g，加適量蒸餾水溶解后定容至 500mL ;
草酸- ED TA溶液:準(zhǔn)確稱取含結(jié)晶水的草酸 6. 5000g， ED TA 0.0600g，充分溶解定容至1000mL ;
偏磷酸-醋酸溶液:溶解20g片狀偏磷酸于40mL醋酸中，稀釋至500mL ，用濾紙過(guò)濾，取濾液備用;
標(biāo)準(zhǔn)V c溶液:準(zhǔn)確稱取 V c 0. 0500g;用上述配好的草酸- ED TA溶液定容于100mL的容量瓶中，使標(biāo)準(zhǔn)液濃度達(dá)到 0. 5m g mL ;
6%的硫酸溶液。
1.2實(shí)驗(yàn)方法
準(zhǔn)確稱取一定量的市售青椒，加入草酸- ED TA溶液，用攪碎機(jī)搗碎后移入250mL容量瓶中，定容，過(guò)濾，濾液即為待測(cè)樣品的提取液。吸取上述青椒的提取液 1mL于 25mL的容量瓶中，加入 9. 00mL草酸- ED TA溶液1. 00mL偏磷酸-醋酸溶液和 3. 00mL的硫酸，最后再加入 3.00mL鉬酸銨，顯色后，以蒸餾水為參比測(cè)其吸光度。
二、結(jié)果與討論
2.1最大吸收波長(zhǎng)的確定
取一定量的V c 0. 5m g mL標(biāo)準(zhǔn)溶液，采用 1. 2所述的方法進(jìn)行顯色后，在波長(zhǎng) 600nm - 1100nm范圍內(nèi)用紫外可見分光光度計(jì)進(jìn)行波長(zhǎng)掃描，結(jié)果見圖 1。
由圖 1可見鉬藍(lán)的絡(luò)合物在 839nm處有最大吸收值，本實(shí)驗(yàn)選擇 839nm為測(cè)定波長(zhǎng)。
2.2鉬酸銨用量的影響
固定硫酸和V c標(biāo)準(zhǔn)溶液的用量，改變鉬酸銨的用量，測(cè)其吸度。結(jié)果見圖2。由圖2可見隨著鉬酸銨用量的增大，吸光度也隨之增大，在3. 00mL左右吸光，本法選用 3.00mL鉬酸銨。
2.3酸度的影響
其他條件固定，改變硫酸的用量，測(cè)其吸光度。以硫酸的用量為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)，做曲線，結(jié)果見圖3。由圖3可見硫酸的體積在4. 00mL以內(nèi)，吸光度比較穩(wěn)定，但大于4.00mL后隨之減小，超過(guò)5.00mL后吸光度驟然下降。所以本實(shí)驗(yàn)硫酸的體積選用 3. 00mL.
2.4顯色時(shí)間的確定
吸取1. 00mL標(biāo)準(zhǔn)溶液V c于25mL容量瓶中，在上述最佳實(shí)驗(yàn)條件下進(jìn)行顯色后，在不同的顯色條件下測(cè)其吸光度，結(jié)果表明該體系在草酸- ED TA介質(zhì)中于室溫下13m in后反應(yīng)達(dá)到穩(wěn)定，本實(shí)驗(yàn)選擇室溫下顯色時(shí)間為 13m in。
2.5標(biāo)準(zhǔn)曲線的確定
分別吸取 0. 20、0. 40、0. 60、0. 80、1. 00、1. 20mL的標(biāo)準(zhǔn)V c (0. 5m g mL )溶液于 25mL的容量瓶中，分別加入草酸- ED TA 9. 80、9. 60、9. 40、9. 20、9. 00、8. 80mL ，再分別加入 1. 00mL偏磷酸-醋酸溶液，3. 00mL的硫酸溶液和3. 00mL的鉬酸銨溶液，顯色后測(cè)定其吸光度。繪制出以溶液濃度 (C )為橫坐標(biāo)，吸光度 A為縱坐標(biāo)的標(biāo)準(zhǔn)曲線。通過(guò)實(shí)驗(yàn)方法測(cè)定V c濃度與吸光度之間的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為:A = 13.580C + 0. 002，相關(guān)系數(shù) r = 0. 999。V c濃度在 0. 004- 0. 024m g mL范圍內(nèi)服從比耳定律。
2.6樣品回收率和變異系數(shù)的測(cè)定
準(zhǔn)確稱取市售青椒 176. 7914g，經(jīng)過(guò)處理后配成溶液，用上述方法平行測(cè)定 6次。測(cè)得吸光度，在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出對(duì)應(yīng)濃度，并從實(shí)驗(yàn)結(jié)果計(jì)算出相對(duì)平均偏差，回收率和變異系數(shù)，見表 1。
經(jīng)過(guò)計(jì)算市售青椒樣品中的還原型V c的含量為 0. 2390m g g，回收率為 97. 2%。變異系數(shù)為 2.51%。
三、結(jié)論
選用鉬藍(lán)分光法測(cè)定青椒中V c的含量，通過(guò)實(shí)驗(yàn)確定最大吸收波長(zhǎng)，硫酸和.磷鉬酸銨的最佳用量和最佳的顯色時(shí)間，并在最佳條件下測(cè)定樣品中V c含量，該方法簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確。
（內(nèi)容來(lái)源渤海大學(xué)學(xué)報(bào)）
